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  产品名称:CHO小规模培养无血清、无蛋白完全培养基CDM
产品说明:
CHP1无血清、无蛋白、无肽纯化学合成完全培养基(Chemical Defined Medium,CDM)
适用于CHO细胞无血清、无蛋白条件细胞的静止培养(培养瓶,培养板等)、转瓶、滚瓶、非搅拌式的反应器中生长。
规格:  
  1. 即用型500ml
    (无菌,需要添加谷氨酰胺)
    保存方式:4~8℃避光保存,可保存9个月。
  2. 浓缩型4L,8L,20L,200L
    (需要添加谷氨酰胺、碳酸氢钠,加水配置,并过滤除菌)
    保存方式:-20℃避光,可保存3年;
    配置成即用型后于4~8℃避光保存,若未加谷氨酰胺可保存9个月;
    若已加谷氨酰胺可保存6个月。
 
使用方法:  
  1. CHO细胞的转染: 只有CHTS培养基适用。
    CHTS培养基中已经含谷氨酰氨,不需要额外添加。
    浓缩型培养基NaHCO3的加入量为1.68g/L
    *转染参考CHO细胞转染
  2. 对于已经转染的CHO细胞, 适应阶段需要使用CHP1培养基。
    CHP1培养基需加入146mg/L(1mM)谷氨酰胺
    CHP1浓缩型培养基需加入NaHCO3的加入量为2.52g/L
    初期细胞适应培养基时,最好在培养瓶或培养板中来进行培养。在细胞达到7-8×105后再传代。
    培养初期,要经常更换培养基(2-3天),通常只更换50%。
    在细胞适应CHP1以后,还可以在滚瓶、转瓶、小的反应器里培养。
  3. 对于蛋白表达和抗体的大量生产,需要用CHP5或 CHP6在搅拌式的反应器里进行。
 
注意:  
  • 对于贴壁细胞的消化不能用胰酶。可以用EDTA(0.05%或0.1%)。如用胰酶,应快速冲洗。
  • 不能将普通培养基和CCT培养基混合
  • 对于搅拌式培养,要监测糖浓度,保持在1g/L。如低于0.5g/L,细胞会出现成团,生长缓慢,甚至死亡。
 
细胞的适应驯化:  
    使用CHP-1无血清、无蛋白培养基进行培养,需另加入0.1%的PF-68,以防细胞在生长过程中形成大团。但是,上述试剂的加入可能会对重组蛋白的纯化结果有一定影响。  
  1. 采集细胞后,加入CHP-1培养基 ,进行细胞培养,且细胞密度应达到2×105/ml,如:4×106/ml细胞接种在75cm2细胞培养瓶中,加入20 mlCHP-1培养基。如果,培养基的pH值低于支持细胞生长的范围,即pH值< 7.0,培养基的颜色从橘红变为淡黄,这时,需另加入20ml新鲜培养基。这种情况通常在接种后2-3天出现。
  2. 注意观察细胞生长时的状态。培养4-5天,由于细胞内蛋白质的丢失,会导致细胞大量死亡。不过,可以克隆一些代谢活跃的细胞,使它们能够尽快适应新的生长环境。
  3. 当培养基的pH值低于支持细胞生长的范围时,倒出50%的培养基,然后,再加入50%新鲜的培养基,继续进行培养。如果更换培养基的间隔时间越来越短,那么,表明细胞已具有旺盛的代谢能力。可通过逐渐增加新鲜培养基的量,全部替换为新的培养基。为了细胞增殖能够达到满意的效果,必须保证培养过程中使用相同的培养瓶。而且,我们建议:在细胞适应CHP-1培养基的过程中,应频繁地更换培养液,不要急于传代。细胞需要逐渐适应新的培养环境。
  4. 细胞悬浮生长时,最初,可能会形成50个细胞左右的细胞团,大小不一。渐渐地,细胞团消失,细胞扩散增殖,正常悬浮生长。通常使用稀释培养液或加入新鲜培养基的方法来进行传代培养,而且,传代培养时,搅拌式细胞培养反应器中细胞的生长密度应达到2 x 106/ml。
 
注意:
    刚开始使用新培养基进行细胞培养时,为了能够使细胞在24小时内进入正常生长周期,细胞的生长密度应达到8×105/ml才可分瓶,进行传代培养!
 

细胞的冻存:
     冻存液的配置及使用:
     新鲜的CHP1培养基+ 条件培养基CHP1 (1:1) + 7.5% DMSO
     条件培养基是培养细胞2-3天后的培养基
     在收集细胞过程中要绝对轻柔,不要产生气泡
     细胞离心不要超过1分钟
 

国际知名用户:
Boehrinegr Ingelheim    (勃林格殷格翰,德国知名的制药企业)
Organon                   (欧加农,全球知名的荷兰医疗产品公司。属于Akzo Nobel阿克苏诺贝尔公司)
Merial                    (动物医药、保健。是默克和安万特的合资企业)
Abgenix/Amgen            (Abgenix公司致力于人单抗药物的研发及生产,属Amgen子公司。
                            Amgen 公司成立于1980 年,二十多年的发展使其成长为全球生物技术产业的旗
                            舰和Nasdaq生物技术股的领头羊)
Roche.                    (罗氏)
 
CHP1浓缩型培养基4L配置方法   CCT培养基客户名录  
所属公司:瑞士Cell Culture Technologies(CCT)公司产品
所属类别:无血清、无蛋白、无肽纯化学合成完全培养基CDM

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2009-11-14 10:22:00
淋巴细胞 培养聚集成团

2009-10-22 7:27:00
Is it yours too

2009-10-22 7:27:00
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