| 规格: |
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- 即用型500ml
(无菌,需要添加谷氨酰胺) 保存方式:4~8℃避光保存,可保存9个月。
- 浓缩型4L,8L,20L,200L
(需要添加谷氨酰胺、碳酸氢钠,加水配置,并过滤除菌) 保存方式:-20℃避光,可保存3年; 配置成即用型后于4~8℃避光保存,若未加谷氨酰胺可保存9个月; 若已加谷氨酰胺可保存6个月。 |
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| 使用方法: |
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- CHO细胞的转染: 只有CHTS培养基适用。
CHTS培养基中已经含谷氨酰氨,不需要额外添加。 浓缩型培养基NaHCO3的加入量为1.68g/L *转染参考CHO细胞转染
- 对于已经转染的CHO细胞, 适应阶段需要使用CHP1培养基。
CHP1培养基需加入146mg/L(1mM)谷氨酰胺 CHP1浓缩型培养基需加入NaHCO3的加入量为2.52g/L 初期细胞适应培养基时,最好在培养瓶或培养板中来进行培养。在细胞达到7-8×105后再传代。 培养初期,要经常更换培养基(2-3天),通常只更换50%。 在细胞适应CHP1以后,还可以在滚瓶、转瓶、小的反应器里培养。
- 对于蛋白表达和抗体的大量生产,需要用CHP5或 CHP6在搅拌式的反应器里进行。
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| 注意: |
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- 对于贴壁细胞的消化不能用胰酶。可以用EDTA(0.05%或0.1%)。如用胰酶,应快速冲洗。
- 不能将普通培养基和CCT培养基混合
- 对于搅拌式培养,要监测糖浓度,保持在1g/L。如低于0.5g/L,细胞会出现成团,生长缓慢,甚至死亡。
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| 细胞的适应驯化: |
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| 使用CHP-1无血清、无蛋白培养基进行培养,需另加入0.1%的PF-68,以防细胞在生长过程中形成大团。但是,上述试剂的加入可能会对重组蛋白的纯化结果有一定影响。 |
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- 采集细胞后,加入CHP-1培养基 ,进行细胞培养,且细胞密度应达到2×105/ml,如:4×106/ml细胞接种在75cm2细胞培养瓶中,加入20 mlCHP-1培养基。如果,培养基的pH值低于支持细胞生长的范围,即pH值< 7.0,培养基的颜色从橘红变为淡黄,这时,需另加入20ml新鲜培养基。这种情况通常在接种后2-3天出现。
- 注意观察细胞生长时的状态。培养4-5天,由于细胞内蛋白质的丢失,会导致细胞大量死亡。不过,可以克隆一些代谢活跃的细胞,使它们能够尽快适应新的生长环境。
- 当培养基的pH值低于支持细胞生长的范围时,倒出50%的培养基,然后,再加入50%新鲜的培养基,继续进行培养。如果更换培养基的间隔时间越来越短,那么,表明细胞已具有旺盛的代谢能力。可通过逐渐增加新鲜培养基的量,全部替换为新的培养基。为了细胞增殖能够达到满意的效果,必须保证培养过程中使用相同的培养瓶。而且,我们建议:在细胞适应CHP-1培养基的过程中,应频繁地更换培养液,不要急于传代。细胞需要逐渐适应新的培养环境。
- 细胞悬浮生长时,最初,可能会形成50个细胞左右的细胞团,大小不一。渐渐地,细胞团消失,细胞扩散增殖,正常悬浮生长。通常使用稀释培养液或加入新鲜培养基的方法来进行传代培养,而且,传代培养时,搅拌式细胞培养反应器中细胞的生长密度应达到2 x 106/ml。
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注意: 刚开始使用新培养基进行细胞培养时,为了能够使细胞在24小时内进入正常生长周期,细胞的生长密度应达到8×105/ml才可分瓶,进行传代培养!
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细胞的冻存: |
冻存液的配置及使用: 新鲜的CHP1培养基+ 条件培养基CHP1 (1:1) + 7.5% DMSO 条件培养基是培养细胞2-3天后的培养基 在收集细胞过程中要绝对轻柔,不要产生气泡 细胞离心不要超过1分钟 |
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国际知名用户: Boehrinegr Ingelheim (勃林格殷格翰,德国知名的制药企业) Organon (欧加农,全球知名的荷兰医疗产品公司。属于Akzo Nobel阿克苏诺贝尔公司) Merial (动物医药、保健。是默克和安万特的合资企业) Abgenix/Amgen (Abgenix公司致力于人单抗药物的研发及生产,属Amgen子公司。 Amgen 公司成立于1980 年,二十多年的发展使其成长为全球生物技术产业的旗 舰和Nasdaq生物技术股的领头羊) Roche. (罗氏) |
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