肿瘤细胞的培养（2）

二、培养肿瘤细胞的生物学特性的检测

    体外培养的细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列的细胞生物学特性鉴定，其目的在于：证明培养的细胞是否来自原来的肿瘤细胞。说明肿瘤组织类型。描述肿瘤细胞的生物学特性。通常要检查下列项目：

 1、组织起源

    应说明培养材料起源于哪个胚层、器官组织、什么样供体、何种疾病等，必要时要提供病理诊断鉴定资料。

 2、形态观察

    观察细胞一般形态如细胞形状，核浆比例倒置，有丰富的三极或多极有丝分裂，核仁清晰、多个，微丝、微管排列紊乱。

 3、细胞生长特点

    检测细胞生长曲线，细胞分裂指数，倍增时间及细胞周期。癌细胞失去正常的接触抑制，呈多层生长，生长旺盛，倍增时间缩短，饱和密度大，分裂指数较高，具无限增殖能力，细胞浸润能力较强等。

 4、软琼脂培养

    癌细胞在低密度下仍具有高度存活率，并在软琼脂中形成集落。

 5、细胞核型分析

    检测核型特点，染色体数量，有无标记染色体，染色体带型等，癌细胞大多为异倍体，多倍体，并有标记染色体。

 6、动物致瘤试验  裸鼠背部皮下接种1×109~2×109/L癌细胞能生长形成实体瘤，其组织学形态与原发瘤相似。

 7、组织化学检查

    癌细胞中脱氧核糖核酸、酸性磷酸酶和磷脂增多，碱性磷酸酶下降，乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶活性也改变。

 8、其他生物学特性检测  有凝集试验等。

 三、肿瘤细胞的取材和培养

  (一)肿瘤细胞的取材方法

    培养肿瘤细胞的材料一般来自患者，对实体瘤患者可取原发肿瘤组织或转移灶，有胸、腹水患者可取胸水或腹水，白血病患者可取血液或骨髓液进行培养。

 1、实体瘤取材方法

    取术后或活检标本，要尽早浸入无血清培养液保鲜，尽快进行培养。尽可能去除溃疡及坏死组织，避免细菌、霉菌污染，对取自外露的肿瘤组织，应在培养前在含二性霉素B 2μg/mL，青霉素200～1000u/mL，链霉素500μg/mL的培养液中浸泡10～20分钟，再用洗液反复冲洗干净后，再作培养。

 2、体腔液的取材方法

    在无菌条件下采取体腔液(胸水或腹水)，不需加抗凝剂，可直接以1200r/min收集细胞，不要久置，也不要在冰中冷却，而应尽早接种。

 3、血液(骨髓)取材法

    白血病患者可取血液或骨髓，主要以取外周血为研究对象，用肝素抗凝的注射器无菌抽取5～10mL外周血，置于试管中立刻分离培养。