细胞大规模培养的类型和方法（7）
②聚苯乙烯-二乙烯苯微载体
这类微载体有三种，即带负电荷的（磺化过的）载体，带正电荷的（用聚乙烯亚胺涂抹）载体，和胶原涂抹的。这些微载体用于研究内皮细胞和Hela细胞的超微结构和生化特性优于其它一些商品微载体。
③伯胺衍生的聚丙烯酰胺微载体
用微载体系统培养动物细胞，在大部分研究和开发工作中，都把重点指向优化微载体培养系统所涉及的各种因素，很少研究微载体表面的化学性质对细胞培养行为的影响。Reuveny等人研究了聚丙烯酰胺衍生的微载体，得出以下有意义的结论：
1)携带电荷量的重要性? 与叔胺衍生的微载体相比，在低的离子交换能力下，伯胺衍生的微载体能支持细胞贴壁、生长和扩展。
2)细胞类型? 比较几种细胞类型在伯胺衍生的微载体上的生长情况，得出：成纤维细胞(CEF，MRC-5)在叔胺衍生的微载体上生长比伯胺衍生的微载体好。上皮形态细胞（MDCK，MDBK）恰好相反。
3)疏水性? 当碳原子为4-6的碳氢化合物两侧链上接有带电荷的伯胺基团时（决定疏水性参数），细胞能在表面优化生长。如微载体基质上引进疏水性基团（10%甲基丙烯酰胺置换聚丙烯酰胺）时，细胞产率明显下降。
Reuveny根据以上研究结果，开发了新的微载体：二胺基已烷聚丙烯酰胺，它的离子交换能力为0.3～0.9ml/g干珠，与叔胺衍生的微载体比较，有以下优点：
1)细胞贴壁和扩展速度较快。
2)上皮形态细胞产率较高。
3)成纤维形细胞产率与叔胺衍生的微载体相当。
4)细胞能在低电荷下增殖，可能是由于从培养基中吸附血清蛋白的量降至最低的原因。
5)微载体价廉
由以上情况看来，二胺基已烷衍生的聚丙烯酰胺微载体，很有可能替换通用的叔胺衍生的微载体。
衍生的聚丙烯酰微载体，是塑料基质微载体应用比较广的一种。它的制备方法，包括聚丙烯酰胺（PAA）在内，文献中已有报道。
④甘氨酸衍生的聚苯乙烯微载体
这种微载体与表面经过组织处理的苯乙烯恰相反，它是用带正电荷基因交联苯乙烯-二乙烯苯制备的微载体。深层培养原代细胞和二倍体细胞，已成功地在这种微载体表面上增殖。
⑤聚甲苯乙烯微载体
聚苯乙烯微载体，具有溶胀率低、机械强度高、粒径分布狭的优点。但细胞贴壁不完全，表面上生长的细胞分布不均匀，微珠容易沉降。为了克服这些缺点，开发了二乙烯苯交联的聚甲苯乙烯微载体。这种微载体经试用培养BHK细胞、SA7成纤维形细胞和VH2成纤维细胞，并与Cytodex 1比较结果。
使用离子交换量为1.4mL/g的聚甲苯乙烯微载体BHK、SA7和VH2细胞，细胞在微载体表面上贴壁生长数，高于通用的Cytodex 1微载体。
⑥其它塑料基质微载体
其它塑料基质微载体如聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇等微载体，也曾研究用于动物细胞培养。其中亲水性聚乙烯醇可直接用于细胞培养，而疏水性聚甲基丙烯酸酯需经过纤粘素，糖蛋白或胶原进行表面处理，方可使用。
（6） 橡胶作基质的微载体
硅橡胶载体是将未硫化的硅橡胶液，滴到与硅橡胶不溶的凝固液中成珠，然后将珠加热或用紫外照射使之硬化，即成硅橡胶微载体。它用于培养Detrict 551二倍体细胞，经五天培养，细胞增殖比达4～5倍。
（7）玻璃作基质的微载体
玻璃是贴壁培养动物细胞的优良基质，如表面再经过血清，鱼精蛋白等组织处理，优化培养的细胞类型非常广泛。用玻璃基质加工成大量培养动物细胞的载体，一般都是球状，球径大小随培养模式不同而异。如是固定术培养，玻璃珠直径为3mm，一般可用作大量培养多种细胞。如是悬浮培养，微载体的粒度在100～150μm。因玻璃微珠比重大，轻度搅拌难以使其均匀地悬浮在培养基中，一般可采用下列方法来降低微珠的比重：
1)加工成比重1.04左右的空心珠。
2)用腐蚀液浸蚀，加工成比重1.03～1.09的多微孔类似泡沫体的微珠。
3)用聚苯乙烯作母体，表面沉积一层玻璃，得到比重在1.03 ～1.2的微珠。
玻璃基质微载体优点:
1)一般细胞系包括人二倍体成纤维细胞在内，都能在玻璃上生长。
2)用胰蛋白酶消化细胞-微载体，容易把细胞从载体上剥脱下来。
3)在搅拌情况下稳定性高。
4)玻璃不吸附培养基中血清，用后的微载体，稍加处理，即可重复使用。
5)价廉。
（8）液膜微载体
固体基质微载体培养动物细胞，还存在着两个缺点：
1)在培养细胞过程中，大多数通用的微载体基质，能牢固的吸附培养基中血清，致使微载体变性，很难处理使其恢复，故只能一次性使用，使产品成本高。
2)要胰蛋白酶消化细胞-微载体，将细胞从微载体上剥脱下来。进行这一过程，往往有大量细胞损失掉了，有时会高达20%。
为了克服上述两个缺点，Charies等人开发了液膜微载体新工艺。他们的基本依据，是在60年代Rosenberg曾提出动物细胞能贴在氟碳化合物液体表面上生长和扩展。Charies等人将氟碳化合物液体与有几种细胞培养基在乳化状态下搅拌混合，氟碳化合物即分散形成100-500μm的微液珠，它的表面内层用聚赖氨酸覆盖，外层再用血清蛋白覆盖，动物细胞即贴在微液珠表面上生长和扩展。当停止搅拌，将混合物离心分相，培养的细胞游离悬浮在轻相（有机相）和重相（培养基相）之间，有明晰的界面，用移液管即可移出。这一工艺，去除了胰蛋白酶消化程序。氟碳化合物经洗涤处理后，又可重复使用。Charies等人曾培养过BALB-3T3、3T3-L1、SV-T2、鼠细胞、以及人神经包皮成纤维形细胞，都得到比较圆满的结果。
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